ASRIEL Fluor 488，555, 647, 680, 750 SE活化酯標記抗體
1.產品簡介
ASRIEL Fluor系列（可替代Alexa Fluor 系列）熒光探針，具有更強的熒光強度，更廣的pH應用范圍（pH 4～10）, 更好的抗淬滅性。在生物熒光領域已逐漸替代FITC,Cy3, Cy5, Cy5.5, Cy7等熒光染料。 ASRIEL Fluor 750 NHS= ASRIEL Fluor 750 SE～Alexa Fluor 750 SE。
表 ASRIEL Fluor 488，555, 647, 680, 750活化酯的性質參數(shù)
| 488 | 555 | 647 | 680 | 750 |
活化酯分子量 | ～900 | ～1250 | ～1300 | ～1150 | ～1300 |
最大吸收波長(nm) | 494 | 555 | 647 | 680 | 750 |
摩爾吸光系數(shù)(M-1cm-1) | 71 000 | 150 000 | 239 000 | 184000 | 240 000 |
最大發(fā)射波長(nm) | 524 | 565 | 665 | 702 | 775 |
A280nm /Amax | 11% | 8% | 3% | 5％ | 4% |
2. ASRIEL Fluor 標記抗體的參考方案：
1) 蛋白溶解：用0.1 M NaHCO3溶解至終濃度為2mg/mL
將1ml 去離子水加入84mgNaHCO3瓶中，配成1M 的碳酸氫鈉溶液。振蕩或吹打至完全溶解。該溶液pH 約8.3，2～6℃保存可用2 星期；若抗體是溶液，將抗體稀釋至2mg/mL，再加入1/10 體積的上述碳酸氫鈉溶液；若抗體是凍干粉，將1M 碳酸氫鈉溶液用10 倍去離子水稀釋成0.1M 后，用其將抗體溶成2mg/mL的溶液；
2）染料溶解：活化ASRIEL Flour SE染料固體粉末從冰箱放入干燥器中慢慢升至常溫后，用無水DMSO(推薦使用SigmaAldrich貨號276855)將染料配置濃度為1 mg/mL。
3）標記：在1mL蛋白溶液中緩慢加入適量染料溶液，（蛋白:染料摩爾比=1:20～50；質量比可在以下范圍內優(yōu)化10～200ug ASRIEL Flour SE 每毫克IgG抗體）。同時在暗處常溫緩慢攪拌1小時。也可以直接將蛋白溶液直接加入染料的固體粉末的試劑瓶中，同時在暗處常溫緩慢攪拌1小時。
4）純化：用透析法或者葡聚糖Sephadex純化產品后，產品冷凍干燥成粉末或在0.01 M PBS/2mM疊氮化鈉溶液中，-20℃避光儲存。
5）貯存：標記好的蛋白貯存于2～6℃，避光。若純化的蛋白偶聯(lián)物濃度小于1mg/mL，加入BSA 或其他穩(wěn)定蛋白1～10mg/ml。在2mM 疊氮鈉存在的情況下，2～6 度可保存幾個月。保存更長時間，則需分裝后-20℃保存。避免反復凍融，避光保存。
3.計算標記比例F/P值：
對于IgG 等大多數(shù)抗體來說，摩爾吸光系數(shù)為203000，F/P值在4～9 之間是最合適。
ASRIEL Flour 750標記蛋白F/P值計算：
1）用PBS 精確倍數(shù)稀釋定量的少許純化過的偶聯(lián)蛋白，在1cm比色皿中測定280nm和750nm的光吸收；
2）計算樣品中的蛋白濃度：蛋白摩爾濃度=(A280-(A750×0.04))×稀釋倍數(shù)/203000
3）計算標記比例：每摩爾蛋白結合的染料摩爾數(shù)=A750×稀釋倍數(shù)/(240000×蛋白摩爾濃度)
4. 活性染料穩(wěn)定性與儲存：
請注意：未開封的粉末在避光干燥-20℃可存放6月。其水溶液現(xiàn)配現(xiàn)用不能儲存。任何溶解后的染料最好立即使用；無水的DMSO溶液-20°C保存最多2個星期。
特別提醒：
1) 本公司所有產品僅限于專業(yè)人員用于生命科學研究，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅！
2) 本公司所有產品必須由合格專業(yè)技術人員操作同時佩戴口罩/手套/實驗服并遵守生物實驗室安全操作規(guī)程！
