產(chǎn)品介紹
Fluo-4, AM
產(chǎn)品組成：
中文名：鈣熒光探針Fluo-4, AM，CAS#：273221-67-3；分子式：C51H50F2N2O23 =1096.94
英文名：1-[2-Amino-5-(2,7-difluoro-6-hydroxy-3-oxo-9-xanthenyl)phenoxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N',N'-tetraacetic
acid, pentaacetoxymethyl ester
產(chǎn)品簡介：
分子式：C51H50F2N2O23 分子量：1096.94
性質(zhì)： 外觀：橙紅色粉末； 純度：≥90%（HPLC）
鈣指示劑是結(jié)合 Ca2+ 后顯示熒光增強(qiáng)的分子。Fluo-3 應(yīng)用在流式細(xì)胞分析上，如涉及籠狀螯合劑光活化、第二信使和神經(jīng)遞質(zhì)的實驗以及基于細(xì)胞的藥理學(xué)篩選，用于 Ca2+ 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的空間動力學(xué)成像。Fluo-4
是 fluo-3 的類似物，其中兩個氯取代基被氟取代，導(dǎo)致在 488 nm
波長處的熒光激發(fā)增強(qiáng)，因此熒光信號水平更高。將溶解后的指示劑直接加入含有培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)皿中，即可向細(xì)胞加載 AM
酯形式的這類鈣離子指示劑。這些指示劑可用于熒光和共聚焦顯微鏡、流式細(xì)胞分析以及微孔板篩選應(yīng)用。
Fluo-4是一種將Fluo-3結(jié)構(gòu)中的Cl替換成F的鈣熒光探針。由于將Cl替換成了電子吸引力更強(qiáng)的F，它的最大激發(fā)波長會向短波長處偏離10
nm左右。這個波長更接近于氬激光器的波長，所以用氬激光器激發(fā)時，F(xiàn)luo-4的熒光強(qiáng)度比Fluo-3強(qiáng)一倍。Fluo-4,
AM穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞后被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fluo-4，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)，F(xiàn)luo-4若以游離配體形式存在時幾乎是非熒光性的，但是當(dāng)它與細(xì)胞內(nèi)鈣離子結(jié)合后可以產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光，最大激發(fā)波長為494nm，最大發(fā)射波長為516nm?？梢允褂眉す夤簿劢癸@微鏡或流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的變化。
使用說明：for Human T cells
1. 1） 試劑 2 mM的Fluo-4, AM/DMSO（將1mg Fluo-4, AM溶于442μL DMSO）
Pluronic F127； Hanks balanced salt solution（HBSS）
HEPES buffer saline（10mM HEPES，1mM Na2HPO4，137mM NaCl，5mM KCl，1mM CaCl2，0.5mM MgCl2，5mM glucose，0.1% BSA，pH 7.4）
（2） 操作
①. 向Fluo-4, AM/DMSO溶液中加入16.5mg Pluronic F127，Pluronic F127可以 防止Fluo-4, AM在HBSS中聚合并能幫助其進(jìn)入細(xì)胞。
②. 用HBSS稀釋Fluo-4, AM溶液，制備4μM的Fluo-4, AM工作液。
③. 將Fluo-4, AM工作液加入細(xì)胞，在37℃培養(yǎng)20分鐘。
④. 加入5倍體積的含有1%胎牛血清的HBSS，再繼續(xù)培養(yǎng)40分鐘。
⑤. 用HEPES buffer saline洗滌細(xì)胞3次，然后用HEPES buffer saline使細(xì)胞重懸浮，制成1×105 cells/mL的溶液。
⑥. 37℃下培養(yǎng)10分鐘，然后用該細(xì)胞進(jìn)行熒光鈣離子檢測。激發(fā)波長494nm，發(fā)射波長516nm。
*標(biāo)記的條件因細(xì)胞種類而異，在每次實驗前，請先確定最佳條件。以上方法僅供參考。
保存條件： -20℃避光保存，有效期一年。
特別提醒：
1) 本公司所有產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員用于生命科學(xué)研究，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅!
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