產(chǎn)品介紹

吖啶橙AO/EB雙熒光染色試劑盒

吖啶橙(Acridine Orange), 屬于三環(huán)雜芳香燃料，可以標(biāo)記DNA、RNA，屬于異染性熒光染料，AO常用于細(xì)胞內(nèi)DNA和RNA進(jìn)行檢測(cè)。AO與核酸結(jié)合方式主要有：1、插入性結(jié)合，AO嵌入核酸雙鏈的堿基對(duì)之間，這種結(jié)合方式主要為AO與DNA的結(jié)合，其熒光發(fā)射峰為530nm，激發(fā)后呈綠色熒光，其熒光發(fā)射峰為640nm，激發(fā)后呈紅色熒光，少量結(jié)合會(huì)呈桔黃色或桔紅色熒光。因此，AO嵌合到雙鏈DNA分子中顯綠色，與DNA單鏈或RNA結(jié)合時(shí)發(fā)橙紅色熒光。Ethidium Bromide嵌合到雙鏈DNA或RNA的堿基對(duì)中，無(wú)堿基特異性，發(fā)紅色熒光。

吖啶橙能透過(guò)胞膜完整的細(xì)胞，嵌入細(xì)胞核DNA，與雙鏈DNA結(jié)合后發(fā)出綠色熒光，溴化乙錠(EB)僅能透過(guò)胞膜受損的細(xì)胞，嵌入核DNA，發(fā)橘紅色熒光。凋亡的細(xì)胞呈現(xiàn)為染色增強(qiáng)，熒光更為明亮，均勻的圓狀或固縮狀、團(tuán)塊狀結(jié)構(gòu)。非凋亡細(xì)胞核呈現(xiàn)熒光深淺不一的結(jié)構(gòu)樣特征。二者很容易判別。在熒光顯微鏡下觀察，可見(jiàn)四種細(xì)胞形態(tài)：活細(xì)胞(VN)，核染色質(zhì)著綠色并呈正常結(jié)構(gòu)；早期凋亡細(xì)胞(VA)，核染色質(zhì)著綠色呈固縮狀或圓珠狀；晚期凋亡細(xì)胞(NVA)，核染色質(zhì)為橘紅色并呈固縮狀或圓珠狀；非凋亡的死亡細(xì)胞(NVN)，核染色質(zhì)著橘紅色并呈正常結(jié)構(gòu)。本產(chǎn)品所含穩(wěn)定劑不影響實(shí)驗(yàn)效果。

吖啶橙(AO)-EB雙染色試劑盒使用方法：（僅供參考）
 使用前先根據(jù)用量，將AO溶液和EB溶液按1:1混合成工作液，先用現(xiàn)配。
  a)對(duì)于貼壁細(xì)胞或爬片，去掉培養(yǎng)基，用PBS洗兩遍去除殘余培養(yǎng)基和未貼壁細(xì)胞，加入新的PBS；如果需要觀察全部細(xì)胞特性，保留未貼壁細(xì)胞，可以直接在培養(yǎng)基中加入工作液。按照每毫升培養(yǎng)基或PBS中加入20uL工作液即可。室溫放置2-5min后于熒光顯微鏡下觀察。
  b)對(duì)于懸浮細(xì)胞，可直接加入工作液或離心收集細(xì)胞后在PBS中加入工作液。按照每毫升培養(yǎng)基或PBS中加入20uL工作液即可。室溫放置2-5min后于熒光顯微鏡下觀察。

染色結(jié)果：

吖啶橙(AO)-EB雙染色試劑盒注意事項(xiàng)：

1. 用能通過(guò)活細(xì)胞膜與DNA結(jié)合后發(fā)藍(lán)色熒光的Hoechist 33342和只能通過(guò)死細(xì)胞與DNA結(jié)合后發(fā)紅色熒光的propidium iodide對(duì)細(xì)胞進(jìn)行雙染的方法也比較常用。

2. 如有低溫離心機(jī)進(jìn)行離心效果更佳。

3. 操作過(guò)程中應(yīng)注意減少染色溶液暴露于強(qiáng)光下的時(shí)間。

4. 含酚紅培養(yǎng)基對(duì)觀察有輕微影響。建議使用無(wú)酚紅培養(yǎng)基。

5. 染色液工作濃度和染色時(shí)間可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)情況適當(dāng)調(diào)整，以期達(dá)到佳效果。

6. EB 和吖啶橙(Acridine Orange)有一定毒性，請(qǐng)小心操作。

所有產(chǎn)品僅限用于研發(fā)，必須由專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員操作同時(shí)佩戴口罩/手套/實(shí)驗(yàn)服并遵守生物實(shí)驗(yàn)室安全操作規(guī)程！

有效期： 4度密封避光12個(gè)月有效。