Annexin V-FITC/PI 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品介紹:
磷脂酰絲氨酸(PS)是一種帶負(fù)電荷的磷脂,正常細(xì)胞中,PS只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè),而在細(xì)胞凋亡早期,細(xì)胞膜PS由脂膜內(nèi)側(cè)翻向細(xì)胞膜外側(cè),使PS暴露在細(xì)胞膜外表面。Annexin V是一種分子量為35~36kD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白,與磷脂酰絲氨酸有高度親和力,故可通過細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。因此Annexin V被公認(rèn)為檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。
富百科將Annexin V進(jìn)行綠色熒光(FITC)標(biāo)記,以標(biāo)記了的Annexin V作為探針,利用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀可檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一種核酸染料,它不能透過正常細(xì)胞或早期凋亡細(xì)胞的完整的細(xì)胞膜,但對(duì)凋亡中晚期的細(xì)胞和壞死細(xì)胞,PI能夠透過細(xì)胞膜而使細(xì)胞核染紅。因此采用Annexin V與PI雙染的方法,就可以將處于不同凋亡時(shí)期的細(xì)胞區(qū)分開來。
圖1. 細(xì)胞凋亡過程中磷脂酰絲氨酸(PS)外翻示意圖
試劑盒組份:
Reagents | 20 assays | 50 assays | 100 assays | Storage |
Annexin V-FITC | 100 μl | 250 μl | 500 μl | 4°C避光 |
Propidium Iodide, PI | 200 μl | 500 μl | 1000 μl | 4°C避光 |
Binding Buffer ( 4X ) | 4 ml | 10 ml | 20 ml | 4°C |
所需實(shí)驗(yàn)器材:
微量移液器;PBS;不含EDTA的胰酶消化液;低速離心機(jī);流式細(xì)胞儀
注意事項(xiàng):
1. 此試劑盒僅供生物實(shí)驗(yàn)研究使用。操作時(shí)必須戴口罩/手套/實(shí)驗(yàn)服和其它生化實(shí)驗(yàn)室防護(hù)措施。
2. 微量試劑需離心數(shù)秒將試劑收集至管底后再開蓋取用。
3. Propidium Iodide(PI)有毒,操作時(shí)要帶手套,使用時(shí)避免與皮膚,眼睛和黏膜接觸。
4. Annexin V-FITC中含有劇毒成分疊氮化鈉(NaN3), 操作時(shí)要帶手套,使用時(shí)避免與皮膚,眼睛和黏膜接觸。
5. 本試劑盒用于檢測(cè)活細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí),細(xì)胞數(shù)量不應(yīng)低于1x106。
6. 染色后宜盡快檢測(cè),時(shí)間過長可能會(huì)導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
7. Annixin V檢測(cè)凋亡細(xì)胞的方法適用于懸浮生長的細(xì)胞,如:淋巴細(xì)胞等細(xì)胞的檢測(cè)。對(duì)于貼壁生長的細(xì)胞,由于在胰酶等消化處理過程中會(huì)造成細(xì)胞膜的損傷,會(huì)造成較高的假陽性,而用細(xì)胞刮子會(huì)造成細(xì)胞粘連成團(tuán),而影響檢測(cè),可將胰酶消化后的細(xì)胞保存在含2%BSA的PBS中,防止進(jìn)一步的損傷。盡管目前,包括國外也有一些單位采用該方法檢測(cè)貼壁生長的細(xì)胞。我不推薦用該方法檢測(cè)。因?yàn)槠渲貜?fù)性較差,且需要操作時(shí)非常小心。
8. 消化貼壁細(xì)胞殘留的胰酶會(huì)消化并降解Annexin V-FITC,最終導(dǎo)致染色失敗。
9. 細(xì)胞固定后可能導(dǎo)致熒光的淬滅,請(qǐng)不要固定樣品。
特別提醒:
1) 本公司所有產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員用于生命科學(xué)研究,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅。
2) 本公司所有產(chǎn)品必須由合格專業(yè)技術(shù)人員操作同時(shí)佩戴口罩/手套/實(shí)驗(yàn)服并遵守生物實(shí)驗(yàn)室安全操作規(guī)程!