ASRIEL Fluor 488，555, 647, 680, 750 SE活化酯標(biāo)記抗體

1.產(chǎn)品簡(jiǎn)介  

 ASRIEL Fluor 系列（可替代Alexa Fluor 系列）熒光探針，具有更強(qiáng)的熒光強(qiáng)度，更廣的pH應(yīng)用范圍（pH 4～10）, 更好的抗淬滅性。在生物熒光領(lǐng)域已逐漸替代FITC,Cy3, Cy5, Cy5.5, Cy7等熒光染料。 ASRIEL Fluor 750 NHS= ASRIEL Fluor 750 SE～Alexa Fluor 750 SE。

表 ASRIEL Fluor 488，555, 647, 680, 750活化酯的性質(zhì)參數(shù)

2. ASRIEL Fluor 標(biāo)記抗體的參考方案：

1) 蛋白溶解：用0.1 M NaHCO₃溶解至終濃度為2mg/mL

   將1ml 去離子水加入84mgNaHCO₃瓶中，配成1M 的碳酸氫鈉溶液。振蕩或吹打至完全溶解。該溶液pH 約8.3，2～6℃保存可用2 星期；若抗體是溶液，將抗體稀釋至2mg/mL，再加入1/10 體積的上述碳酸氫鈉溶液；若抗體是凍干粉，將1M 碳酸氫鈉溶液用10 倍去離子水稀釋成0.1M 后，用其將抗體溶成2mg/mL的溶液；

2）染料溶解：活化ASRIEL Flour SE染料固體粉末從冰箱放入干燥器中慢慢升至常溫后，用無(wú)水DMSO(推薦使用SigmaAldrich貨號(hào)276855)將染料配置濃度為1 mg/mL。

3）標(biāo)記：在1mL蛋白溶液中緩慢加入適量染料溶液，（蛋白:染料摩爾比=1:20～50；質(zhì)量比可在以下范圍內(nèi)優(yōu)化10～200ug ASRIEL Flour SE 每毫克IgG抗體）。同時(shí)在暗處常溫緩慢攪拌1小時(shí)。也可以直接將蛋白溶液直接加入染料的固體粉末的試劑瓶中，同時(shí)在暗處常溫緩慢攪拌1小時(shí)。

4）純化：用透析法或者葡聚糖Sephadex純化產(chǎn)品后，產(chǎn)品冷凍干燥成粉末或在0.01 M PBS/2mM疊氮化鈉溶液中，-20℃避光儲(chǔ)存。

5）貯存：標(biāo)記好的蛋白貯存于2～6℃，避光。若純化的蛋白偶聯(lián)物濃度小于1mg/mL，加入BSA 或其他穩(wěn)定蛋白1～10mg/ml。在2mM 疊氮鈉存在的情況下，2～6 度可保存幾個(gè)月。保存更長(zhǎng)時(shí)間，則需分裝后-20℃保存。避免反復(fù)凍融，避光保存。

3.計(jì)算標(biāo)記比例F/P值：

對(duì)于IgG 等大多數(shù)抗體來(lái)說(shuō)，摩爾吸光系數(shù)為203000，F/P值在4～9 之間是最合適。

ASRIEL Flour 750標(biāo)記蛋白F/P值計(jì)算：

1）用PBS 精確倍數(shù)稀釋定量的少許純化過(guò)的偶聯(lián)蛋白，在1cm比色皿中測(cè)定280nm和750nm的光吸收；

2）計(jì)算樣品中的蛋白濃度：蛋白摩爾濃度=(A₂₈₀-(A₇₅₀×0.04))×稀釋倍數(shù)/203000

3）計(jì)算標(biāo)記比例：每摩爾蛋白結(jié)合的染料摩爾數(shù)=A₇₅₀×稀釋倍數(shù)/(240000×蛋白摩爾濃度)

4. 活性染料穩(wěn)定性與儲(chǔ)存：

 請(qǐng)注意：未開(kāi)封的粉末在避光干燥-20℃可存放6月。其水溶液現(xiàn)配現(xiàn)用不能儲(chǔ)存。任何溶解后的染料最好立即使用；無(wú)水的DMSO溶液-20°C保存最多2個(gè)星期。

特別提醒：

1) 本公司所有產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員用于生命科學(xué)研究，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅！

2) 本公司所有產(chǎn)品必須由合格專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員操作同時(shí)佩戴口罩/手套/實(shí)驗(yàn)服并遵守生物實(shí)驗(yàn)室安全操作規(guī)程！